牛鼻氣管炎及其診斷

牛鼻氣管炎 (bovine rhinotracheitis, IBR) 是一種牛的流行性疾病，患病會引起牛的產(chǎn)量下降、高額的治療費(fèi)用和貿(mào)易限制，因此會在世界范圍內(nèi)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。

牛孢疹病毒 BoHV-1 是傳染性牛鼻氣管炎 (IBR) 的病原體，而 BoHV-1 抗體則是診斷牛鼻氣管炎的生物標(biāo)記物。對牛進(jìn)行定期的 BoHV-1 抗體監(jiān)測可以在病牛患病初期進(jìn)行個體識別與隔離，有效地降低牛鼻氣管炎在牛群中大規(guī)模傳播的風(fēng)險，因此對保障畜牧業(yè)收益具有重要的價值。

干血斑: 方便的血樣采集

目前 BoHV-1 抗體監(jiān)測采用的是酶聯(lián)免疫吸附測定 (Enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)，需要由獸醫(yī)抽取牛的靜脈血液，離心分離出血漿，再進(jìn)行檢測。靜脈取血的取血量大，且過程比較復(fù)雜，需要獸醫(yī)具有豐富的經(jīng)驗(yàn)。取血過程中，動物往往會出現(xiàn)抵觸情緒，有時甚至?xí)艿襟@嚇。

干血斑 (Dried blood spots, DBS) 是一種新型的血液采集和儲存方法。它將微升級末梢血采集到樣品卡上，干燥后形成斑點(diǎn)。該方法采樣過程簡單方便，飼主可自行操作；侵入性小，特別適合對小型動物 / 寵物和實(shí)驗(yàn)動物進(jìn)行血樣采集。

相比于液態(tài)血，固態(tài)的干血斑具備更好的穩(wěn)定性和生物安全性，可實(shí)現(xiàn)樣品的常溫運(yùn)輸，更可以以更溫和的條件儲存樣品，構(gòu)建生物樣本庫。

簡單血樣采集步驟

DBS 干血斑應(yīng)用案例:
牛孢疹病毒抗體的檢測

研究首次將 DBS 技術(shù)應(yīng)用于 BoHV-1 抗體的檢測中，從技術(shù)上證明了其應(yīng)用可行性。BoHV-1 陽性和陰性的干血斑樣本通過全自動干血斑萃取平臺 DBS-MS 500 Hct 直接萃取收集，再進(jìn)行 ELISA 測試，檢測 BoHV-1 抗體。

與干血斑樣品對應(yīng)的血漿樣本 (BoHV-1 陽性和陰性) 也采用相同的檢測方式進(jìn)行檢測，用于對比干血斑樣本與傳統(tǒng)血漿樣本的異同。另外，此項(xiàng)研究還探討了干血斑的儲存條件與時間對 BoHV-1 抗體檢測結(jié)果的影響。

樣本

9 個陽性干血斑樣本、20 個陰性干血斑樣本及對等數(shù)量的陽性和陰性血漿樣本

檢測目標(biāo)

BoHV-1 抗體

卡片

Ahlstrom AutoCollect^TM?

樣本運(yùn)輸條件

室溫三天、-20°C 四個月、保存四周 (含 4 個不同條件: 4°C、室溫、37°C 及一小時紫外光照后室溫)

提取方法

Epitope ELISA kit 緩沖液直接提取

檢測方法

ELISA、IDEXX IBR gB X3 Ab Test kit

結(jié)果

干血斑樣本的檢測結(jié)果與傳統(tǒng)血漿樣本結(jié)果完全一致。

另外，干血斑樣本在室溫下保存 3 天或在 -20°C 保存 4 個月，都能得到準(zhǔn)確的檢測結(jié)果，因此其高穩(wěn)定性可以允許干血斑樣本的室溫運(yùn)輸及長期保存，特別適合用于相關(guān)疾病的大規(guī)模篩查。

從左至右的五個條件分別為室溫保存 3 天的陽性干血斑、-20°C 保存 4 個月的陽性干血斑樣本、陽性血漿樣本、陰性干血斑樣本和陰性血漿樣本?？贵w效價說明: >55% 認(rèn)定為陽性，<45% 認(rèn)定為陰性，45% – 55% 之間為懷疑樣本。

參考文獻(xiàn):

Lechmann, J.; Gehrig, O.; Luginbühl, M.; Fraefel, C.; Gaugler, S.?Fully automated dried blood spot sample handling and extraction for BoHV-1 antibody testing by ELISA. J. Virol. Methods 2022, 310, 114626.

配合干血斑加快進(jìn)行生物標(biāo)記物的研究，力揚(yáng)推出 CAMAG 全自動干血斑萃取系統(tǒng) DBS-MS 500，從自動化方向?qū)鹘y(tǒng)干血斑技術(shù)進(jìn)行的一次全面升級，可實(shí)現(xiàn)全自動、快速、無人值守的干血斑樣品制備，并可結(jié)合質(zhì)譜、PCR、NGS 測序及 ELISA 等檢測技術(shù)，應(yīng)用于以下領(lǐng)域：

• 健康生物標(biāo)記物檢測

• 治療藥物監(jiān)測

• 基因組檢測

• 感染檢測

• 生物樣本庫

• 藥物的臨床前試驗(yàn)

• 食品安全

DBS 干血斑應(yīng)用特集 4: 牛孢疹病毒抗體的檢測最先出現(xiàn)在實(shí)驗(yàn)室自動化應(yīng)用一致性評價丨香港力揚(yáng)企業(yè)-溶出儀-藥物溶出度儀廠家。

骨質(zhì)疏松癥

骨質(zhì)疏松是一種影響人類和動物骨骼健康的慢性疾病。它通常是多因素引起的，包括衰老、激素水平下降、營養(yǎng)不均衡、慢性疾病和長期服藥等。其主要特征是骨骼失去密度和質(zhì)量，導(dǎo)致骨骼變得脆弱、容易骨折的狀況。危害主要包括以下幾個方面：

• 增加骨折風(fēng)險，甚至可能導(dǎo)致長期殘疾和生活能力下降。

• 增加經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，可能需要手術(shù)、康復(fù)訓(xùn)練、陪護(hù)和營養(yǎng)等諸多開支。

• 行動不便，嚴(yán)重的可能需要臥床，康復(fù)過程可能需要長時間，嚴(yán)重影響生活質(zhì)量和心理健康。

生物標(biāo)記物
是監(jiān)測骨質(zhì)疏松癥的最佳方法

雖然骨質(zhì)疏松癥是一種常見的人畜疾病，且危害較大，但是其特點(diǎn)是發(fā)病緩慢的慢性病。因此，早期診斷和預(yù)防是治療骨質(zhì)疏松癥的關(guān)鍵。

?要對付骨質(zhì)疏松癥，生物標(biāo)記物 (Biomarkers) 是現(xiàn)行流行的診斷方法。

生物標(biāo)記物是指在體內(nèi)可以指示生物體生理狀態(tài)、病理狀態(tài)或藥物反應(yīng)的分子。通過生物體內(nèi)的生物樣本 (例如血液、尿液、唾液、組織等) 進(jìn)行檢測，可以幫助醫(yī)生更早地發(fā)現(xiàn)疾病、監(jiān)測疾病的進(jìn)展、評估治療效果。

DBS 干血斑應(yīng)用案例:
小鼠骨質(zhì)疏松癥
生物標(biāo)記物的研究

雌激素水平低下被認(rèn)為是導(dǎo)致骨質(zhì)疏松癥的主要原因。卵巢摘除 (ovariectomy，簡稱OVX) 小鼠是一種較成熟的動物模型，通過雙側(cè)卵巢摘除術(shù)，可以成功建立模擬雌激素缺乏而導(dǎo)致的骨質(zhì)疏松動物模型。

本研究旨在應(yīng)用干血斑技術(shù)對 OVX 模型小鼠和正常對照小鼠進(jìn)行方便、微量地采樣，研究兩者干血斑樣本中代謝產(chǎn)物的差異，對潛在表征小鼠骨質(zhì)疏松癥的生物標(biāo)記物進(jìn)行篩查。

樣本

OVX 模型小鼠和正常對照小鼠的干血斑樣本?

檢測目標(biāo)

氨基酸類、脂肪酸類和膽汁酸類代謝產(chǎn)物

卡片

Ahlstrom AutoCollect^TM?

樣本運(yùn)輸條件

室溫

提取方法

直接提取

檢測方法

液相色譜-質(zhì)譜 (LC-MS)

結(jié)果

通過對干血斑樣本的檢測，發(fā)現(xiàn)有兩種生物標(biāo)記物在 OVX 模型小鼠和正常對照小鼠中具有含量顯著性差異 (α= 0.05)。干血斑采血方便、微量和樣本室溫運(yùn)輸?shù)奶攸c(diǎn)使其在動物疾病相關(guān)的生物標(biāo)記物檢測領(lǐng)域具有巨大的發(fā)展?jié)摿Α?/p>

參考圖片來源:?

Chen, L.; et al. Hepatic magnetic resonance imaging with T2* mapping of ovariectomized rats: correlation between iron overload and postmenopausal osteoporosis. European Radiology. 2014, 24(7):1715.

配合干血斑加快進(jìn)行生物標(biāo)記物的研究，力揚(yáng)推出 CAMAG 全自動干血斑萃取系統(tǒng) DBS-MS 500，從自動化方向?qū)鹘y(tǒng)干血斑技術(shù)進(jìn)行的一次全面升級，可實(shí)現(xiàn)全自動、快速、無人值守的干血斑樣品制備，并可結(jié)合質(zhì)譜、PCR、NGS 測序及 ELISA 等檢測技術(shù)，應(yīng)用于以下領(lǐng)域：

• 健康生物標(biāo)記物檢測

• 治療藥物監(jiān)測

• 基因組檢測

• 感染檢測

• 生物樣本庫

• 藥物的臨床前試驗(yàn)

• 食品安全

更多干血斑的應(yīng)用案例

• 犬焦蟲病

• 精準(zhǔn)品種鑒定 (基因分型)

DBS 干血斑應(yīng)用特集 3: 動物疾病的生物標(biāo)記物最先出現(xiàn)在實(shí)驗(yàn)室自動化應(yīng)用一致性評價丨香港力揚(yáng)企業(yè)-溶出儀-藥物溶出度儀廠家。

寵物是人類的伙伴和情感寄托，它們的健康狀況也時刻牽動著我們的心。然而，動物無法像人類一樣通過言語表達(dá)自己的身體狀況，這就需要我們緊密關(guān)注它們的身體變化。使用什么方法檢測動物狀況才最合適，是寵物醫(yī)院及醫(yī)生關(guān)注的一大問題。

為了推動高效及精準(zhǔn)的動物健康狀況檢測，力揚(yáng)在?5 月?23 – 25 日，參加了?[第十五屆東西部小動物臨床獸醫(yī)師大會]，并帶來了?CAMAG 全自動干血斑萃取系統(tǒng)?DBS-MS 500，助力動物疾病的篩查診斷，以便及時采取相應(yīng)的治療措施，為動物健康保駕護(hù)航。

大會期間，超過?16000 名寵物醫(yī)療行業(yè)大咖、專家學(xué)者和全國各地的獸醫(yī)師紛至沓來，共同探討寵物醫(yī)療行業(yè)的發(fā)展現(xiàn)狀和新機(jī)遇。為期三天的寵物醫(yī)療年度大會精彩紛呈，其盛大規(guī)模更吸引多達(dá) 18 個國家級媒體出席采訪，超過 300 篇媒體報道同期發(fā)布，引來全城熱話。

力揚(yáng)也借此機(jī)會與來自全國各地的 8000 多家寵物醫(yī)院的獸醫(yī)師和寵物醫(yī)院管理者，以及獸藥研發(fā)人員和第三方檢測人員，還有 1000 多家經(jīng)銷商共同交流和探討了干血斑技術(shù)在寵物市場的應(yīng)用場景、技術(shù)細(xì)節(jié)和商業(yè)推廣。

眾多與會者都對干血斑技術(shù)表示出濃厚的興趣，力揚(yáng)企業(yè)展區(qū)內(nèi)的人流絡(luò)繹不絕。

CAMAG DBS 應(yīng)用知多少

干血斑?(Dried blood spots, DBS) 是一種新型的血液采集和儲存方法。它將微升級末梢血采集到樣品卡上，干燥后形成斑點(diǎn)。該方法采樣過程簡單方便，飼主可自行操作；侵入性小，特別適合對小型動物、寵物和實(shí)驗(yàn)動物進(jìn)行血樣采集。相比于液態(tài)血，固態(tài)的干血斑具備更好的穩(wěn)定性和生物安全性，可實(shí)現(xiàn)樣品的常溫運(yùn)輸，能夠以更溫和的條件儲存樣品，構(gòu)建生物樣本庫。

DBS?(干血斑) 技術(shù) “微量、方便、安全、穩(wěn)定” 的四大特點(diǎn)，使其在動物的血樣采集和儲存上具有廣泛的應(yīng)用前景，為動物疾病的早期診斷、生物標(biāo)記物檢測、抗體檢測和基因分型等提供了更加高效、穩(wěn)定和可靠的樣本制備方式。

配合這個主題，我們近期正在推出《DBS 干血斑應(yīng)用特集》，解構(gòu)了干血斑技術(shù)在犬焦蟲病檢測和動物精準(zhǔn)品種鑒定的應(yīng)用案例，點(diǎn)擊鏈接了解文章詳情：

• DBS 干血斑應(yīng)用特集 1: 犬焦蟲病

• DBS 干血斑應(yīng)用特集 2: 精準(zhǔn)品種鑒定

后續(xù)我們將繼續(xù)發(fā)布干血斑在牛孢疹病毒抗體檢測及生物標(biāo)記物檢測中的具體應(yīng)用，幫助大家進(jìn)一步了解，敬請持續(xù)關(guān)注！

CAMAG 全自動干血斑萃取系統(tǒng)
DBS-MS 500

CAMAG 全自動干血斑萃取系統(tǒng) DBS-MS 500，可實(shí)現(xiàn)全自動、快速、無人值守的干血斑樣品制備，并可結(jié)合質(zhì)譜、PCR、NGS 測序及 ELISA 等檢測技術(shù)，應(yīng)用于以下領(lǐng)域：

• 健康生物標(biāo)記物檢

• 治療藥物監(jiān)測

• 基因組檢測

• 感染檢測

• 生物樣本庫

• 藥物的臨床前試驗(yàn)

• 食品安全

第十五屆東西部小動物臨床獸醫(yī)師大會圓滿舉行最先出現(xiàn)在實(shí)驗(yàn)室自動化應(yīng)用一致性評價丨香港力揚(yáng)企業(yè)-溶出儀-藥物溶出度儀廠家。

你能分得清以下兩對
狗狗分別是什么品種嗎？

如今飼養(yǎng)寵物成了不少民眾增添生活樂趣的方式。隨著寵物市場的快速發(fā)展，人們對于寵物的品種、血統(tǒng)等信息有著更高的關(guān)注。然而在 “寵物經(jīng)濟(jì)” 升溫的同時，寵物消費(fèi)糾紛也頻頻發(fā)生。據(jù)國內(nèi)一項(xiàng)消委會的調(diào)查²，寵物消費(fèi)類投訴主要聚焦于寵物宣傳與實(shí)際不符。其中，最主要問題是商家以低價品種冒充高價品種賣給消費(fèi)者以謀取暴利。

動物的品種鑒定方法比較

目前對寵物品種鑒定主要是通過對動物的外貌特征和行為特征進(jìn)行分析和比較，這對于普通消費(fèi)者具有不小的難度。如上圖所示，本身有些品種的寵物外貌就極其相似，再加上 “寵物美容” 的加工，基本可以達(dá)到真假難辨的程度。

相比于外貌和行為特征，遺傳特征可以更準(zhǔn)確地鑒定動物的品種，比如基因分型就是一種動物的精準(zhǔn)品種鑒定方法。通過對動物的 DNA 進(jìn)行 PCR (聚合酶鏈反應(yīng)) 擴(kuò)增和測序，可以檢測特定的基因或基因組合，從而精準(zhǔn)地確定動物的品種。

該技術(shù)對品種鑒定的準(zhǔn)確率遠(yuǎn)高于外貌和行為特征鑒定的方法。它不僅可以用來進(jìn)行鑒定寵物品種的鑒定，還可以準(zhǔn)確鑒定寵物的血緣關(guān)系 (如父母、兄弟姐妹等)，篩查寵物遺傳疾病和輔助寵物的選種育種等工作。另外，基因分型也是寵物個體永久且不可偽造的身份標(biāo)識，可用于對丟失或被盜的寵物進(jìn)行身份鑒定。

動物的精準(zhǔn)品種鑒定應(yīng)用領(lǐng)域

動物精準(zhǔn)品種鑒定除了上述在寵物市場方面的應(yīng)用，在其它領(lǐng)域也具有十分重要的應(yīng)用：

– 通過進(jìn)行精準(zhǔn)的品種鑒定，可以檢測動物是否攜帶特定的遺傳疾病基因，從而幫助飼主更好地了解寵物的健康狀況，進(jìn)行相應(yīng)的健康管理和疾病預(yù)防。

– 在畜牧業(yè)中，對于畜禽的品種和血統(tǒng)信息管理，以及對于提高養(yǎng)殖效益和優(yōu)化育種計劃具有重要意義。

– 在科研領(lǐng)域，需要對實(shí)驗(yàn)動物野生型和突變型進(jìn)行精準(zhǔn)的鑒定，研究特定基因分型對于生理、病理和藥物的影響。

– 在動物保護(hù)領(lǐng)域，通過對野生動物進(jìn)行精準(zhǔn)的品種鑒定，可以更好地了解野生動物的遺傳多樣性、種群結(jié)構(gòu)和遷徙路徑等信息，從而進(jìn)行科學(xué)研究和保護(hù)管理。

干血斑：方便的血樣采集

目前用于動物品種鑒定的基因分型采用的方法是 PCR 法 (聚合酶鏈反應(yīng))，需要在診所由醫(yī)師抽取寵物的靜脈血液進(jìn)行采樣。靜脈取血的取血量大，且過程比較復(fù)雜，需要動物醫(yī)師具有豐富的經(jīng)驗(yàn)和飼主的配合。取血過程中，寵物往往會出現(xiàn)抵觸情緒，有時甚至?xí)艿襟@嚇。

干血斑 (Dried blood spots, DBS) 是一種新型的血液采集和儲存方法。它將微升級末梢血采集到樣品卡上，干燥后形成斑點(diǎn)。該方法采樣過程簡單方便，飼主可自行操作；侵入性小，特別適合對小型動物 / 寵物和實(shí)驗(yàn)動物進(jìn)行血樣采集。相比于液態(tài)血，固態(tài)的干血斑具備更好的穩(wěn)定性和生物安全性，可實(shí)現(xiàn)樣品的常溫運(yùn)輸，更可以以更溫和的條件儲存樣品，構(gòu)建生物樣本庫。?

DBS 干血斑應(yīng)用案例:
轉(zhuǎn)基因小鼠的基因分型

轉(zhuǎn)基因小鼠在繁殖后，由于基因重組，第二代小鼠需要進(jìn)行轉(zhuǎn)基因遺傳鑒定，以保持傳代后基因型的一致。目前的通常做法是剪取小鼠尾部或耳部組織樣品，然后提取核酸進(jìn)行鑒定。而干血斑采樣是一種微創(chuàng)采樣技術(shù)，創(chuàng)口小，需要的血量小，可減少小鼠損傷。

樣本

轉(zhuǎn)基因小鼠干血斑 (客戶提供的純化核酸樣本)?

檢測目標(biāo)

轉(zhuǎn)基因小鼠特異性基因序列

卡片

Ahlstrom AutoCollect^TM?

樣本運(yùn)輸條件

室溫

提取方法

直接提取，spin column 純化

檢測方法

PCR (聚合酶鏈反應(yīng))，瓊脂凝膠電泳

結(jié)果

通過 DBS 干血斑微量采樣，可成功鑒定出小鼠基因型。其方便、微量的采血和樣本室溫運(yùn)輸?shù)奶攸c(diǎn)使其在動物的精準(zhǔn)品種鑒定領(lǐng)域具有巨大的發(fā)展?jié)摿Α?/p>

同期加推

第十五屆東西部小動物臨床獸醫(yī)師大會，集合由 57 個省市小動物獸醫(yī)師學(xué)（協(xié)）會的力量，共同舉辦。大會旨在推動中國小動物臨床獸醫(yī)技術(shù)與國際接軌，提升中國小動物獸醫(yī)師的整體水平，推廣世界先進(jìn)小動物診療技術(shù)，展示國際領(lǐng)先的寵物醫(yī)療設(shè)備、寵物藥品、飼料及試劑等。

大會將于 2023 年 5 月 23 日 – 25 日在青島舉行，力揚(yáng)將參展此次盛會，推出 CAMAG 全自動干血斑萃取系統(tǒng) DBS-MS 500，從自動化方向?qū)鹘y(tǒng)干血斑技術(shù)進(jìn)行的一次全面升級，可實(shí)現(xiàn)全自動、快速、無人值守的干血斑樣品制備，并可結(jié)合質(zhì)譜、PCR、NGS 測序及 ELISA 等檢測技術(shù)，應(yīng)用于以下領(lǐng)域：

• 健康生物標(biāo)記物檢測

• 治療藥物監(jiān)測

• 基因組檢測

• 感染檢測

• 生物樣本庫

• 藥物的臨床前試驗(yàn)

• 食品安全

參考來源:

https://www.akc.org/expert-advice/lifestyle/dog-breed-look-alikes/

https://www.songjiang.gov.cn/xwzx/001001/20221129/5021e78c-4914-49fa-8eb7-6146a4169c0b.html

更多干血斑的應(yīng)用案例

• 犬焦蟲病

DBS 干血斑應(yīng)用特集 2: 精準(zhǔn)品種鑒定 (基因分型)最先出現(xiàn)在實(shí)驗(yàn)室自動化應(yīng)用一致性評價丨香港力揚(yáng)企業(yè)-溶出儀-藥物溶出度儀廠家。

明媚的春日是帶狗狗外出玩耍的好時機(jī)，它們在草地上奔跑，在灌木叢中互相嬉戲，追逐小球、飛盤，享受新鮮空氣和自由的感覺。但是春天氣溫轉(zhuǎn)暖，野外的各種蟲子也開始蠢蠢欲動，如果您的狗狗外出回家變得格外煩躁和不舒服，經(jīng)常抓撓或者不停地舔自己的皮膚，那么很可能它換上了犬焦蟲癥！

什么是犬焦蟲病？

焦蟲 (Babesia) 是一種血液寄生蟲，可以寄生在犬的紅細(xì)胞內(nèi)，引起溶血性貧血和其他臨床癥狀。焦蟲病主要通過蜱蟲叮咬傳播，也可以通過輸血、垂直傳播 (從母狗到幼犬) 以及罕見的經(jīng)粘膜傳播途徑感染犬。

當(dāng)焦蟲侵入狗的血液中，雖然犬的免疫系統(tǒng)能殺死一部分焦蟲，但焦蟲能進(jìn)行分裂繁殖，并讓被感染的狗成為慢性帶原者。這也是犬焦蟲癥通常具有潛伏期的原因，快則一、兩個月就會發(fā)病，慢則半年之后才發(fā)病。

犬焦蟲病發(fā)病的
三個階段

潛伏期

無異常反應(yīng)與現(xiàn)象，但體內(nèi)的紅血球在緩慢崩解，紅血球數(shù)值偏低。

發(fā)病初期

厭食、精神不濟(jì)、毛色暗淡，肝、脾腫大，口腔黏膜蒼白，尿液類似烏龍茶的深色。

發(fā)病后期

癱瘓、紅血球快速崩解，隨時有生命危險，必須馬上輸血搶救。

預(yù)防和早期診斷是
應(yīng)對焦蟲癥的最佳方法

預(yù)防蜱蟲叮咬主要包括: 定期使用驅(qū)蟲藥品、避免帶狗狗到蚊蟲較多的草地、戶外活動結(jié)束后檢查狗狗身上是否有蜱蟲躲藏。

由于焦蟲癥通常具有潛伏期，癥狀并不明顯，因此定期為狗狗做相關(guān)的檢測是防治犬焦蟲病的關(guān)鍵！

檢測方案:
DBS 干血斑 方便的血樣采集

目前檢測犬焦蟲病最準(zhǔn)確和靈敏的方法是 PCR 法 (聚合酶鏈反應(yīng))，需要在診所由醫(yī)師抽取狗狗的靜脈血液進(jìn)行采樣。靜脈取血的取血量大，且過程比較復(fù)雜，需要動物醫(yī)師具有豐富的經(jīng)驗(yàn)和飼主的配合。取血過程中，狗狗往往會出現(xiàn)抵觸情緒，有時甚至?xí)艿襟@嚇。

干血斑 (Dried blood spots, DBS) 是一種新型的血液采集和儲存方法。它將微升級末梢血采集到樣品卡上，干燥后形成斑點(diǎn)。該方法采樣過程簡單方便，飼主可自行操作；侵入性小，特別適合對小型動物 / 寵物和實(shí)驗(yàn)動物進(jìn)行血樣采集。相比于液態(tài)血，固態(tài)的干血斑具備更好的穩(wěn)定性和生物安全性，可實(shí)現(xiàn)樣品的常溫運(yùn)輸，更可以以更溫和的條件儲存樣品，構(gòu)建生物樣本庫。

簡單血樣采集步驟

DBS 干血斑應(yīng)用案例:
早期診斷犬焦蟲癥

樣本

寵物醫(yī)院采集的犬類干血斑 (每個干血斑只需一滴全血，約 20 微升)?

檢測目標(biāo)

小焦蟲 (Babesia gibsoni) 特異性基因 (PCR 引物由客戶提供)。

卡片

Ahlstrom AutoCollect^TM?

樣本運(yùn)輸條件

室溫

提取方法

直接提取，未純化?

檢測方法

PCR (聚合酶鏈反應(yīng))，瓊脂凝膠電泳

結(jié)果

通過 DBS 干血斑微量采樣，所有犬干血斑的陽性和陰性樣本均能被正確檢出，說明干血斑可以應(yīng)用于犬焦蟲病的早期診斷。其方便、微量的采血和樣本室溫運(yùn)輸?shù)奶攸c(diǎn)使其在寵物疾病快速診斷領(lǐng)域具有巨大的發(fā)展?jié)摿Α?/p>

同期加推

第十五屆東西部小動物臨床獸醫(yī)師大會，集合由 57 個省市小動物獸醫(yī)師學(xué)（協(xié)）會的力量，共同舉辦。大會旨在推動中國小動物臨床獸醫(yī)技術(shù)與國際接軌，提升中國小動物獸醫(yī)師的整體水平，推廣世界先進(jìn)小動物診療技術(shù)，展示國際領(lǐng)先的寵物醫(yī)療設(shè)備、寵物藥品、飼料及試劑等。

大會將于 2023 年 5 月 23 日 – 25 日在青島舉行，力揚(yáng)將參展此次盛會，推出 CAMAG 全自動干血斑萃取系統(tǒng) DBS-MS 500，從自動化方向?qū)鹘y(tǒng)干血斑技術(shù)進(jìn)行的一次全面升級，可實(shí)現(xiàn)全自動、快速、無人值守的干血斑樣品制備，并可結(jié)合質(zhì)譜、PCR、NGS 測序及 ELISA 等檢測技術(shù)，應(yīng)用于以下領(lǐng)域：

• 健康生物標(biāo)記物檢測

• 治療藥物監(jiān)測

• 基因組檢測

• 感染檢測

• 生物樣本庫

• 藥物的臨床前試驗(yàn)

• 食品安全

DBS 干血斑應(yīng)用特集 1: 犬焦蟲病最先出現(xiàn)在實(shí)驗(yàn)室自動化應(yīng)用一致性評價丨香港力揚(yáng)企業(yè)-溶出儀-藥物溶出度儀廠家。

本屆冬奧會有眾多精彩看點(diǎn)，身形矯健、奮勇拼搏的運(yùn)動員，激動人心、動人心魄的雪上運(yùn)動賽項(xiàng)，還有多項(xiàng)頂尖科技將集體亮相，創(chuàng)下歷屆冬奧會第一：第一個全5G覆蓋的國際重大體育賽事；媒體轉(zhuǎn)播全面上云；“冰絲帶”(國家速滑館)是目前世界上最大的采用二氧化碳跨臨界直冷制冰技術(shù)打造的多功能全冰面，碳排放趨近于零；DBS干血斑技術(shù)正式成為冬奧會興奮劑檢測方法……

北京冬奧會興奮劑檢測的新亮點(diǎn)：?DBS

一直以來，為保證體育賽事的公平公正公開，興奮劑檢測已成為運(yùn)動員們賽前必不可少的體檢項(xiàng)目。

興奮劑檢測可采用尿檢和血檢。尿檢的取樣需要由專人陪同，涉及“隱私性”;血檢則強(qiáng)調(diào)專業(yè)性和程序正確性，必須由具備醫(yī)學(xué)資質(zhì)的專業(yè)人士，嚴(yán)格使用取血器材來抽取血樣，且抽血程序需要得到運(yùn)動員的認(rèn)可和簽字確認(rèn)。

自2019年某運(yùn)動員在興奮劑檢測中砸碎血樣瓶引發(fā)國際體壇重大風(fēng)波后，WADA(世界反興奮劑組織)就計劃引入一種新型的樣本采集方式，力求解決運(yùn)動員興奮劑檢測的取樣問題，避免同類事件再次發(fā)生。同年10月，由WADA牽頭發(fā)起，包括中國反興奮劑中心在內(nèi)的全球7大國家反興奮劑中心和國際組織共同決定將大力推行DBS方法，目標(biāo)在2022年北京冬季奧運(yùn)會和殘奧會上實(shí)現(xiàn)使用DBS作為常規(guī)方法進(jìn)行興奮劑檢測。

DBS (Dried Blood Spot)的中文是干血斑 / 干血點(diǎn)(將指血滴在專用卡紙上，干燥后形成的斑點(diǎn)),可用于微量血液樣本的儲存、運(yùn)輸和分析檢測。與傳統(tǒng)的血檢方式相比，DBS具有獨(dú)特的優(yōu)勢：采集方便，可由運(yùn)動員自行獨(dú)立完成;微量采樣，幾滴指血即可;固態(tài)血液樣品安全、穩(wěn)定，運(yùn)輸和儲存方便。

因此，DBS在運(yùn)動員興奮劑檢測中的應(yīng)用，不僅適用于更大規(guī)模、更大覆蓋面的檢查，進(jìn)而更有力地打擊使用興奮劑的違規(guī)者;還可以更好地保護(hù)運(yùn)動員的隱私，提高運(yùn)動員對于興奮劑檢測的依從性，尤其是在全球新冠病毒大流行的背景下，DBS可以通過更少的人際接觸展開興奮劑的檢查工作。

解決?DBS分析“痛點(diǎn)”?，?CAMAG領(lǐng)跑反興奮劑檢測

隨著DBS方法在興奮劑檢測中的大力推廣應(yīng)用，興奮劑檢測的頻率和覆蓋面將大幅增加。然而，在海量的樣品面前，傳統(tǒng)的DBS樣品前處理方法已經(jīng)不再適用，打孔-洗脫-超聲-離心等多步驟，不僅費(fèi)時耗力，而且難以質(zhì)控，也成為DBS分析的最大瓶頸。

鑒于此，瑞士 CAMAG 公司依靠多年來在DBS樣品處理領(lǐng)域積累的豐富經(jīng)驗(yàn)和技術(shù)，推出新一代全自動干血斑樣品處理系統(tǒng)：DBS-MS 500 HCT。“DBS-MS 500 HCT可直接萃取DBS樣品，連續(xù)制備2,000個樣品，1個樣品的制備僅需2分鐘，無縫偶聯(lián)主流的液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜LC-MS/MS，高效實(shí)現(xiàn)樣品全自動分析，并適用于萃取痕量的內(nèi)源性和外源性物質(zhì)?！盋AMAG 中國總代理力揚(yáng)企業(yè)的產(chǎn)品經(jīng)理介紹說。

一直以來，DBS分析過程中斑點(diǎn)面積還原成全血體積的準(zhǔn)確性是一個“痛點(diǎn)”問題。由于每個人的HCT(血細(xì)胞比容)不一樣，轉(zhuǎn)換因子會受到HCT的影響，因此，測量HCT就成為了一個突破口。

由于運(yùn)動員在運(yùn)動前后會有大量體液的流失，這會造成HCT發(fā)生劇烈的變化，從而降低其DBS興奮劑檢測的準(zhǔn)確性。新一代全自動干血斑樣品處理系統(tǒng)DBS-MS 500 HCT裝有HCT分析模塊，通過分析每個DBS樣品的HCT值，可以消除HCT對全血體積定量不準(zhǔn)確性的影響，從而大幅提高分析的準(zhǔn)確度，進(jìn)而大幅提高運(yùn)動員DBS興奮劑檢測的準(zhǔn)確性。

目前DBS-MS 500 HCT已成功應(yīng)用于自行車運(yùn)動員的興奮劑檢測。曲馬多(Tramadol)，是一種阿片類藥物 ，主要用作鎮(zhèn)痛藥，可緩解普通到嚴(yán)重的疼痛。由于其在競技自行車運(yùn)動中的濫用，2019年國際自行車聯(lián)盟已將其列為禁用藥物。針對曲馬多 (tramadol)及其代謝物O-去甲基曲馬多(O-desmethyltramadol)，CAMAG 開發(fā)了一種方法，能夠?qū)崿F(xiàn)4分鐘從樣品到結(jié)果的全自動分析(圖1)。研究者對26個真實(shí)樣品的進(jìn)行傳統(tǒng)血檢和DBS檢測，并將兩種方法進(jìn)行了交叉驗(yàn)證。結(jié)果顯示，借助DBS-MS 500 HCT，DBS檢測和傳統(tǒng)血檢的結(jié)果一致性良好(圖2)，證明了DBS興奮劑檢測的可行性。

圖 1

圖 2

DBS興奮劑檢測?，中國在行動

反興奮劑是一項(xiàng)長期而艱決的工作，需要全球各國的共同合作與努力。中國反興奮劑中心作為全球DBS項(xiàng)目的發(fā)起者之一，全方位參與項(xiàng)目的規(guī)則和方法研究。中國反興奮劑中心主任陳志宇表示，在全面總結(jié)、汲取備戰(zhàn)東京奧運(yùn)會史上最嚴(yán)反興奮劑工作成功經(jīng)驗(yàn)基礎(chǔ)上，中國反興奮劑中心結(jié)合冬季項(xiàng)目備戰(zhàn)的特點(diǎn)，制定了“更嚴(yán)”的北京冬奧會反興奮劑工作方案和措施，以“零容忍”的態(tài)度全力實(shí)現(xiàn)北京冬奧會興奮劑問題“零出現(xiàn)”目標(biāo)。

反興奮劑中心與國際同行合作開展的干血點(diǎn)檢測項(xiàng)目將在2022年北京冬奧會和冬殘奧會中執(zhí)行。2021年6月，反興奮劑中心發(fā)布《反興奮劑中心關(guān)于開展干血點(diǎn)興奮劑檢查的通知》，并正式啟動DBS興奮劑檢查檢測工作。截至2021年10月底，北京冬奧會備戰(zhàn)興奮劑檢查總例數(shù)已突破4000例，到運(yùn)動員進(jìn)村，還將實(shí)施超過2000例檢查。

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